常見問題(FAQs)

Genome editing products

基因組編輯產品   常見問題 我能用基因組編輯技術在基因組上引入一個點突變嗎? 能:能。對于這種基因組編輯操作,您需要帶有靶點同源重組臂以及所需點突變的供體 DNA。供體 DNA 可以是一個質粒或一條單鏈的寡聚核苷酸。供...

哪些表達載體適用于將感興趣的ORFs通過ORFEXPRESS? Gateway? 穿梭克隆轉移到表達載體上?

回答:Invitrogen公司有一系列的pDEST表達載體(目標載體)和ORFEXPRESS™ 穿梭克隆相匹配,這些載體可以在細菌、酵母、昆蟲和哺乳動物細胞等不同的宿主中表達各種類型   的蛋白(如天然的、N-端或C-段的融合蛋白)。

GeneCopoeia提供其他物種的ORF克隆嗎?

回答:我們目前提供已構建的人、小鼠ORF克隆。我們正要推出其他模式動物(如大鼠)的全長ORF克隆。如果您擁有感興趣的模式動物基因的全長ORF序列,請提供給我們這些基因的基本信息(GenBank Accession或核酸序列),我們會優先將這些基因克隆到...

我做了表達實驗,但卻沒有目標蛋白的表達,為什么?

回答:一個帶有啟動子的正確的ORF DNA序列并不能保證相應的蛋白的表達。影響重組蛋白表達的因素很多:1)你選用的的表達載體是否與你的宿主相匹配,如pReceiver-M01是在哺乳動物細胞中表達的,而pReceiver-B01則是在細菌里表達的。2)如果表達的...

你們對每一個基因都做過表達了嗎?

回答:我們對所有全長ORFs進行了 用pReceiever-B01載體和一種表達宿主細胞(E. coli)在一種表達條件的表達實驗。我們沒有用其它表達宿主細胞和其它表達條件對所有全長ORFs進行蛋白表達的檢測。  

通過全序列測序,我發現這是我感興趣的基因中的一個可變剪接體,你們能重新克隆或替換它嗎?

回答:我們將盡最大的努力克隆原始的剪接形式,為你提供有償替換的克隆。但是,我們無法保證得到特異的剪接體的克隆,也無法確定獲得的克隆的具體日期。

在序列上有一個核苷酸堿基的改變,而且它所編碼的氨基酸正是位于許多文獻上報道的蛋白的活性位點,你們將會如何處理?

回答:對于這類情況,盡管我們不提供無償克隆替換,但是我們可以以最低價提供突變服務(可以改變任意地核苷酸組成)。

因為是用PCR的方法擴增全長ORFs,你們將如何處理從你們那里購買的由于PCR產生的突變的ORF克隆?

回答:我們的系統結合了一些新的、高保真的PCR專利技術,這些方法可以使擴增全長ORFs的保真度提高10倍。它是通過在低的反應溫度下減少引物與模板DNA 的非特異結合以及減少擴增所需的循環數來達到高保真的目的的。由于遺傳多態性和基因的多選擇性...

如何解釋你們實際序列與GenBank上序列的差異?

回答:有兩種不同的可能或兩者兼而有之的可能:1)自然因素,包括遺傳多態性、選擇性剪接方式、NCBI數據庫注釋的更新導致基因的多個版本、數據遞交者的DNA測序的錯誤或著模糊不清;2)PCR過程導致的改變。購買ORF克隆的用戶往往只是將我們的ORF...

你們是如何生產全長的ORF的?

回答:我們結合多種專利技術以提高PCR的保真度,通過PCR把全長的ORF擴增出來(詳見ORF白皮書)。我們采用70多種人組織cDNA 文庫作為模板來生產全長ORF。  

我想對ORFs進行測序,我需要用什么引物?

回答:對于ORFEXPRESS™ 穿梭克隆,正向測序引物(ORF 5'端上游)是:5'-CCCAGTCACGACGTTGTAAAACG,反向引物(ORF 3'端下游)是5'-ATGGTCATAGCTGTTTCCTG。對于OmicsLink™ clones,你可在我們的網頁上查閱測序引物的序...

你們是如何對你們的克隆進行質量控制的?

回答:我們對每一個全長ORF克隆進行了測序。另外,在每個克隆投遞給你之前,我們會再次用ORF特異性的核酸引物進行PCR驗證,確保投遞的克隆正確無誤。

我在你們公司的網頁的數據庫中找不到我所需要的基因,你們能為我克隆該基因嗎?價格如何?

回答:是的,我們可以為你克隆你所需要的基因。我們的目標是克隆人類所有基因的全長ORF,我們正朝這方面努力。你所感興趣的基因有可能已在我們的生產線上或即將進行克隆。如果你給我們提供GenBank 登記號、基因名稱、核苷酸或氨基酸序列的信息,...

在某些情況下,當比較你們的參照序列與NCBI上具有相同基因名稱或描述的序列時,發現這兩者間有一定程度上的差異。您如何解釋這種矛盾?

回答:由于編碼基因的多選擇性剪接,以及從不同實驗室關于ORFs、多態性或由于克隆復制出現冗余等的最新信息,一個基因座上的基因通常有多個轉錄產物。因此在選擇基因全長的ORF克隆時,我們盡量選擇每個基因座上最有代表性的轉錄本,這個轉錄本與...

你們的網頁上相關基因/克隆所注釋的序列與你提供的克隆的實際序列是否一致?

回答:不,你所看到的序列并非我們的克隆的實際序列。該序列是從NCBI (GenBank)上序列記錄中選擇出來的 并用以設計5′和3′端引物以及合成全長ORF的參考序列。  

多克隆位點(MCS)的序列是什么?

回答:多克隆位點(MCS)序列是根據你所購買的ORFEXPRESS™ 穿梭克隆和 OmicsLink™表達克隆上全長ORF的不同而決定的。首先你要核對隨產品郵寄的數據表里的信息,并通過如下圖示的簡圖確認序列。 圖1. 產品目錄號為GC-B0128的...

OmicsLink? 表達克隆的篩選標記是什么?

回答:Ampicillin或Neomycin. 請仔細確認后再訂購OmicsLink™ 表達克隆 (http://www.qnveor.icu/tech/omicslink/).

ORFEXPRESS? 穿梭克隆的篩選標記是什么?

回答:Kanamycin.

你們的OmicsLink? 表達克隆與Gateway? pDEST目的載體(表達載體)構建的表達克隆有何區別?

回答:廣州復能基因有限公司的 OmicsLink™ Expression Clones是根據其專利克隆技術ReJion生產的。使用該技術表達5'-標簽-ORF融合蛋白,5'標簽與全長ORF的起始密碼子ATG之間不會有 attB位點。因此,使用OmicsLink™ Expressio...

如果我用Gateway?克隆系統表達N端融合蛋白,ORFEXPRESS?穿梭克隆上的重組位點(attB)和多克隆位點將會成為編碼序列,那么有多少個氨基酸被添加到標簽蛋白和所需蛋白的N末端之間?

回答:融合多肽與ORF之間有14個氨基酸殘基,其中AttB重組位點編碼8個氨基酸(Thr Ser Leu Tyr Lys Lys Ala Gly),另外六個氨基酸則是由AttB和ORF起始密碼子(ATG)之間的序列編碼。

我想把ORFEXPRESS? 穿梭克隆上的ORF轉移到自己的含有某些特征的載體里去,但這些載體不與Gateway?兼容的,怎么辦?

回答:每一個ORFEXPRESS™ 穿梭克隆中的ORF兩側都有兩個多克隆位點(MCS)。你可通過選擇合適的內切酶, 在ORFEXPRESS™ 穿梭克隆上切出完整的ORFs, 并運用經典的亞克隆方法將ORFs構建到你所需要的載體。

當表達C-端融合蛋白時如何把全長ORF上的終止密碼子除去?

回答:可以通過點突變的方法去除終止密碼子。我們大約已經構建了20,000多個在3′端帶有不同標簽蛋白序列的全長ORF OmicsLink™ 表達克隆(Expression Clones)(http://www.qnveor.icu/tech/omicslink/). 你只要付一小筆額外的費用,...

可以用ORFEXPRESS? 穿梭克隆表達一個含有N端或C端標簽蛋白的融合蛋白質嗎?

回答:可以,有兩個選擇。你可選用我們開發和構建的OmicsLink™ 表達克隆。此表達克隆已經將ORF構建在N端或C端帶有不同標簽蛋白的表達載體,請到網頁 (http://www.qnveor.icu/tech/omicslik/)上查詢OmicsLink™的產品信息。另一種選...

你們是如何選擇克隆在ORFEXPRESS? 穿梭克隆的全長ORFs的?

回答:選擇過程是十分嚴格的。包括從多種cDNA數據庫和基因組數據庫中全長編碼基因序列的提取、比較和確認以及相關信息的注釋。通過計算機聚類和人工校正的方法來減低冗余并排除錯誤的基因。  

怎樣選擇合適的表達載體把感興趣的ORF 從ORFEXPRESS? 穿梭克隆轉移到表達載體?

回答:Invitrogen公司有一系列的pDEST表達載體(目標載體)和ORFEXPRESS™ 穿梭克隆相匹配,這些載體可以在細菌、酵母、昆蟲和哺乳動物細胞等不同的宿主中表達各種類型的蛋白(如天然的、N-端或C-段的融合蛋白)。但是, 為你科研的更加方便...

為什么說ORFEXPRESS? 穿梭克隆是與Gateway?克隆技術是相兼容的?

回答:ORFEXPRESS™ 穿梭克隆載體是由美國GeneCopoeia公司構建。其特點是通過重組技術把在重組位點attL1和attL2間的全長ORF整合到Gateway® pDEST系列的表達克隆的attR1和attR2重組位點間。并且,GeneCopoeia的ORFEXPRESS™穿梭克...

為什么應該選擇全長ORF克隆而非其他的全長cDNA克隆?

回答:全長ORF克隆只含有全長蛋白質的編碼序列而其他全長cDNA克隆則還包含一些非翻譯的序列,如5'端或3'端非翻譯區。眾所周知,在表達宿主中, 這些非翻譯的序列可能會對所需編碼蛋白質的轉錄和翻譯過程有負面的影響。如想進一步詳細的比...

什么是全長ORF克隆?

回答:一個全長ORF(開放閱讀框)克隆是指一個插入有編碼全長蛋白質的DNA片斷的質粒。該插入DNA片斷只含有編碼一個全長蛋白質的序列(從起始密碼到終止密碼),而不包含有5′或3′端的非翻譯區(UTRs)或內含子。